Promotores

PROMOTORES:         

Os promotores são sequências de DNA específicas muito importantes para o início da transcrição. Tais sequências são reconhecidas por algumas proteínas específicas, chamadas de fatores de transcrição, que trazem a RNA polimerase para realizar a montagem dos RNAs.

TATA box

O TATA box é um dos principais promotores eucarióticos conhecidos e encontra-se a 5' do ponto de início da transcrição da grande maioria dos genes. Ele foi descoberto após a realização de vários estudos de footprinting*, onde se observava a ligação da enzima RNA polimerase II logo acima (upstream) do ponto de início da transcrição, em uma sequência que era conservada entre diversos organismos. Essa sequência localiza-se, normalmente, cerca de 25 nucleotídeos antes do local de início da transcrição e foi chamada de TATA box. A sequência consenso consiste de um heptanucleotídeo composto por A’s e T’s e está presente em praticamente todos os genes de eucariotos que levam à produção de RNAs mensageiros. O TATA box é semelhante à sequência consenso –10 de procariotos (TATAAT) e frequentemente é flanqueado por regiões ricas em G e C. Mutações nessa sequência diminuem bastante a eficiência do promotor e diminuem a taxa de transcrição do gene. Mesmo mutações que mudem A’s para T’s podem gerar problemas, indicando que não só a porcentagem desses nucleotídeos é importante, como também a sequência específica.

*Footprinting: Consiste numa técnica derivada de princípios usados no sequenciamento de DNA que identifica sequências específicas de DNA a qual uma proteína esteja ligada. Para a identificação e o isolamento de promotores, fragmentos de DNA contendo essa região são isolados e marcados radioativamente na extremidade de uma de suas fitas. Esses fragmentos são divididos em dois grupos: um tratado somente com DNAse e outro tratado com RNA polimerase e DNAse. No primeiro grupo a enzima DNAse introduz quebras aleatórias no fragmento de DNA como um todo. Já no segundo, a região promotora do DNA - que está protegida pela proteína RNA polimerase - não é cortada. Os produtos de clivagem de ambos os grupos são separados por eletroforese em gel e o padrão observado num filme de raio X revela um vazio ou “pegada” na "escada" de bandas radioativas da amostra contendo a RNA polimerase. Os fragmentos ausentes indicam a localização precisa do promotor, que pode ter sua sequência determinada pelo sequenciamento do fragmento original do DNA.

Outros sítios promotores

Além do TATA box, outras sequências consenso são necessárias para a correta e eficiente transcrição de um gene, como os chamados CAAT box e GC box. Esses elementos são frequentemente encontrados em regiões a cerca de 40 a 100 nucleotídeos acima do sítio de início da transcrição, ao contrário dos outros promotores procarióticos - que necessitam estar exatamente a 35 nucleotídeos desse ponto de início - e podem estar presentes em qualquer uma das fitas. Os GC boxes (“ilhas de CpG”) são formados por sequências 5’ GGGCGG 3’ e estão relacionados a grande parte dos genes constitutivos (aqueles que são expressos sempre, não necessitando de regulação). Já os CAAT boxes são formados por sequências 5’ GGNCAATCT 3’.